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細胞培養概念：是一種在體外模擬體內環境的方法，?通過提供無菌、?適宜溫度、?酸堿度和一定營養條件等，?使細胞能夠生存、?生長、?繁殖并維持主要結構和功能的一種技術。?這種技術不僅在生物學研究中扮演著重要角色，?而且在醫學、?農業科學等領域也有廣泛應用。?細胞培養也被稱為細胞克隆技術，?是生物工程技術中核心、?基礎的技術之一。

體外細胞共培養（co-culture)概念：是將兩種細胞（可以來自同一種組織，也可以來自不同的組織）混合共同培養，從而使其中一種細胞的形態和功能穩定表達，并維持較長時間。該技術能模擬體內生成的微環境，便于更好地觀察細胞與細胞、細胞與培養環境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點，填補了單層細胞培養和整體動物實驗的鴻溝。

體外細胞加藥培養概念：此試驗非常適合藥物作用機理的研究，能初步快速有效的探究化合物/藥物的功能和相關信號通路，在具體研究工作中，經常將細胞試驗與整體試驗有機結合，從不同角度分析藥物的作用和機理，能起到相互補充，相互印證的極好效果。

實驗流程：

1、細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中，加入370C預熱的DMEM完全培養基中(其中胎牛血清約為10%)，輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。

加入DMEM完全培養基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養皿/瓶中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

2、細胞傳代

當細胞密度達到80%~90%(過早產量不足，過晚細胞狀態不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養，一般1:3至1:5細胞一代，即從細胞接種到分離再培養的一段時間，非細胞有絲分裂次數)時，去掉完全培養基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細胞最好，最佳消化溫度是370C。顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度)進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。

加入適量DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清，再加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。

加入DMEM完全培養基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養箱繼續培養。

3、細胞凍存

當細胞密度達到80%~90%時，去掉完全培養基，用1XPBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。加入DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清，10% DMSO。

一般來講血清含量可以在10%-90%之間調整，凍存波中加入血清一方面可以為細胞提供營養，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞)，放入凍存管內(管內有異丙醇，以保證溫度降低的速度)，立即放入40C冰箱中凍存30min，然后放入-200C冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內過夜。第二天放入液氨中，可以保存至少兩年，如不放人波氮，可以保存三個月。

細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力，凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡

服務流程：

1、提供詳細實驗方案。

2、接收樣本。

3、培養傳代細胞。

4、細胞計數，接種細胞。

5、根據實驗要求干預處理細胞。

6、根據實驗要求進行后續檢測。

樣本要求及運輸條件：

1、客戶提供細胞樣本：

（1）傳代培養的細胞，需告知細胞名稱、培養條件等基本信息，無細胞名稱的細胞將不提供凍存服務，無培養條件的細胞將無法提供及時的傳代培養等操作。

（2）寄送凍存細胞需用充足干冰保存運輸。

（3）寄送培養細胞需擰緊培養瓶（不透氣瓶蓋），裝滿培養基，封口膜封好，常溫運輸，嚴禁冰凍。

（4）細胞狀態以收到細胞后的觀察狀態為準。

2、客戶提供實驗中的相關試劑：

（1）提供試劑貨號、保質期、保存條件等基本信息。

（2）配制好的試劑需提供名稱、濃度、安全性等信息。

（3）不接收具傳染性的樣本、試劑藥物等等；不接收有生物危害的樣本；不接收有致病性的樣本。