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細胞凋亡周期

細胞凋亡周期

概念:

細胞凋亡與細胞壞死不同,是由細胞自主的有序的死亡,涉及一系列基因的嚴格調控。是為了群體更好地適應生存環(huán)境而采取的細胞應對措施。通常表現(xiàn)為體積縮小、細胞核碎裂、胞質固縮和細胞膜破裂等特征。Annexin-V(膜連蛋白V)識別凋亡或壞死細胞表面的磷脂酰絲氨酸。PI(碘化丙啶)能與DNA結合的熒光染料,不能透過完整的細胞膜。

真核細胞周期包含細胞的生長、復制和分裂等一系列事件。細胞周期即為以分裂周期為單位的細胞發(fā)展過程。G1期(第1生長期)細胞生成RNA和蛋白質誘導生長,DNA含量無變化;S期(合成期)進行DNA合成,DNA含量逐漸增加;G2期(第2生長期)DNA復制后繼續(xù)生長,為有絲分裂做準備,DNA的量為原來的兩倍;M期(有絲分裂期)發(fā)生細胞核分裂和細胞質分裂,產(chǎn)生兩個子細胞。將能DNA結合的熒光染料(常用PI)與細胞共同孵育,染料與細胞中的DNA按比例結合。用流式細胞術可以檢測DNA含量在細胞群中的分布情況。

原理與方法:

細胞凋亡:制備單細胞懸液。棄去培養(yǎng)基,以PBS潤洗一次,加入Annexin V-PI結合液重懸細胞,加入Annexin V-PI室溫下避光孵育約15min。將染色完成的細胞避光冰浴,進行流式細胞儀檢測。

細胞周期:制備單細胞懸液,以PBS洗滌一次,固定細胞。以預冷的PBS洗滌一次后,加入PI染色液37℃避光孵育30min,隨機進行流式細胞儀檢測。


                                                             細胞凋亡檢測/細胞周期檢測

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