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考馬斯亮藍染色

考馬斯亮藍染色

實驗概念:

考馬斯亮藍染色是一種基于蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍染料之間結(jié)合反應的蛋白質(zhì)檢測、純化和定量分析技術。考馬斯亮藍G-250在游離狀態(tài)下呈紅色,與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{色,其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,常用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測


實驗流程:

  1. 電泳首先,將蛋白質(zhì)樣本通過SDS-PAGE電泳進行分離。
  2. 染色電泳結(jié)束后,將凝膠放入考馬斯亮藍染色液中,室溫染色1小時或更長時間,直至凝膠顏色與染色液顏色接近。
  3. 脫色倒出染色液,加入由甲醇、醋酸和去離子水組成的去染液,震蕩脫色2-3小時或直至背景清晰。
  4. 觀察與記錄脫色后,在顯微鏡下觀察蛋白質(zhì)條帶,并使用相機或掃描儀記錄結(jié)果。


注意事項:

  1. 操作安全:考馬斯亮藍染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,操作過程中需佩戴手套,避免染料接觸皮膚。
  2. 染料毒性考馬斯亮藍染料有毒性,不建議加熱使用。操作后需妥善處理廢棄物。
  3. 樣品清洗染色前用純水清洗凝膠能大大減少SDS等干擾雜質(zhì)。
  4. 染色后處理染色后請盡快拍照,純水長時間浸泡會導致蛋白和染料的流失。
  5. 試劑品質(zhì)對染料的品質(zhì)無嚴格要求,但考馬斯亮藍G-250中可溶性染料的含量因來源和供應商不同變動很大,通常認為Serva藍G含量最高。
  6. 器皿要求使用潔凈無洗滌劑的塑料器皿或玻璃器皿,請勿使用石英、硅膠比色杯,因為染料會結(jié)合在此類材料上。


我們提供的結(jié)果形式:

  1. 圖像數(shù)據(jù)提供染色和脫色后的凝膠圖像,展示蛋白質(zhì)條帶的分布情況。
  2. 定量分析通過測量595nm處的吸光度,提供蛋白質(zhì)含量的定量分析結(jié)果。
  3. 實驗報告包含實驗設計、操作步驟、結(jié)果分析等詳細描述,以及實驗中使用的試劑、儀器等信息。
  4. 技術支持提供售后技術支持,確保客戶在下游實驗及投稿過程中的問題得到及時解決。
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