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蛋白互作IP/Co-IP/ChIP

蛋白互作IP/Co-IP/ChIP

概念:

免疫沉淀(IP):免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體對特定蛋白進行純化的技術。通過特異性抗體與目標蛋白的結合,可以將目標蛋白從細胞裂解液中沉淀下來,用于后續的分析。IP主要用于檢測單個蛋白的狀態,如表達量、翻譯后修飾等。

免疫共沉淀(Co-IP):免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)是一種研究兩種蛋白在體內是否存在相互作用的有效方法。通過已知蛋白的抗體捕獲整個蛋白復合物,進而研究復合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。Co-IP的關鍵在于保持蛋白質-蛋白質相互作用的天然狀態,因此通常采用非離子變性劑進行細胞裂解。

染色質免疫沉淀(ChIP):染色質免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)用于研究蛋白質與DNA之間的相互作用,常用于檢測轉錄因子結合位點。ChIP通過抗原抗體的特異性結合,沉淀與目的蛋白相結合的DNA片段,反映結合在DNA序列上的調控蛋白。


區別:

IP主要檢測單個蛋白的狀態,而Co-IPChIP用于研究蛋白之間的相互作用。

Co-IP研究的是體內自然狀態下的蛋白質互作,而ChIP專注于蛋白質與DNA之間的相互作用。

Co-IP結果可能包含間接相互作用,而ChIP通常用于直接的蛋白質-DNA相互作用研究。

注意事項:

1. 細胞裂解條件:Co-IP實驗中,應采用溫和的裂解條件以保持蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑如Np40或Triton x-100。

2. 抗體選擇:需要使用特異性強的抗體,以確保沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,而非外源非特異蛋白。

3. 對照實驗:進行Co-IP時,應使用對照抗體,如正常小鼠IgG或另一類單抗,以排除非特異性結合。

4. 蛋白質定位:確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中,而不是由于細胞的溶解才發生的,這需要進行蛋白質的定位來確定。

5. ChIP實驗:包括細胞固定、染色質斷裂、染色質免疫沉淀、交聯反應的逆轉、DNA的純化及鑒定等步驟,可以用PCR或者高通量測序鑒定DNA與蛋白質的結合情況。


我們提供的實驗結果形式如下:

1、實驗報告:包含實驗設計、操作步驟、結果分析等詳細描述,以及實驗中使用的抗體、試劑和儀器等信息。

2、圖像數據:包括Western Blot、免疫沉淀后的凝膠圖像,以及ChIP實驗中的PCR或測序結果圖。

3、數據分析:提供蛋白質相互作用網絡圖,以及通過質譜鑒定得到的蛋白質列表和相對豐度。

4、技術支持:我們提供售后技術支持,確保客戶在下游實驗及投稿過程中的問題得到及時解決

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